慢病毒包装服务

       慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。目前比较广泛采用的第三代包装系统是四质粒系统，只含有HIV-1共9个基因中的3个，即gGag、pPol、rRev。由于HIV-1基因组成分中60 %被去除,因此父代病毒无法复制，是目前重组系数最低的一个慢病毒包装系统 。采用四质粒系统，即通过将目的基因表达载体和三个包装质粒：pMDLg/pRRE、pVSV-G和pRSV-Rev，在293-T细胞株中共转染即可包装出携带目的基因的慢病毒颗粒。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

柏慈生物优势

1）病毒颗粒可即时转导，节约时间与成本。

2）严格的质量控制保证高品质与高滴度。

3）可有效转导难转染细胞和动物模型。

技术流程

1）构建载体;

2）提取和纯化重组质粒;

3）病毒包装和生产

4）收集病毒液;

5）感染宿主细胞;

6）测定病毒滴度和分析结果

慢病毒包装特点

（1）生产出以HIV-1 为基础的慢病毒，它能有效地感染分裂和非分裂的哺乳动物细胞。

（2）感染宿主广泛，可以感染包括人、猩猩、小鼠、大鼠、兔、狗等所有已经研究过的哺乳动物细胞。

（3）相比传统腺病毒的瞬时转染，慢病毒能够将目的基因整合到宿主基因组，获得长期稳定地表达目的基因的细胞。

（4）表达载体和包装质粒形成反式互补，且包装质粒又分别由三个质粒构成，从而为安全性提供了更加可靠的保障。

结果展示

图A为利用慢病毒包装系统，构建 X基因慢病毒表达载体，并感染到L929细胞中，荧

光显微镜下观察病毒感染后的L929细胞。

图B为利用慢病毒包装系统，构建 Y基因慢病毒表达载体，并感染到HeLa细胞中，

荧光显微镜下观察病毒感染后的HeLa细胞。

应用领域

1、将目的基因 /shRNA/CRISPR-Cas9转入难以转染的细胞，比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞；

2、将目的基因 /shRNA/CRISPR-Cas9转入动物组织，以期获得长期表达；

3、构建稳定表达目的蛋白 /shRNA 的细胞系，再用exvivo的方法导入动物体内；

4、基因治疗， 转基因动物， 基因敲除等；

5、药物研究：构建表达受体蛋白的细胞系，研究药物的作用；

6、快速建立生产目的蛋白的细胞系，非常有前途的真核细胞表达方法。